本试剂盒仅供研究使用。

检测范围： 96T

6U/L-20 0 U/L

使用目的：

本试剂盒用于测定植物组织，细胞及其它相关样本中黄酮醇合成酶（ FLS ） 活性 。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定 标本 中 植物黄酮醇合成酶（ FLS ） 水平。用纯化的 植物黄酮醇合成酶（ FLS ） 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 植物黄酮醇合成酶（ FLS ） ，再与 HRP 标记的黄酮醇合成酶（ FLS ） 抗体结合，形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物 ，经过che底洗涤后 加 底物TMB显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 植物黄酮醇合成酶（ FLS ） 呈正相关。用酶标仪在 450 nm波长下测定吸光度（ OD 值）， 通过标准曲线 计算样品 中植物黄酮醇合成酶（ FLS ） 活性 浓度。

操作步骤

1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、 待测样品孔 。在酶标包被板上标准品准确加样 50 μ l ，待测样品孔中先加样品稀释液 40 μ l ，然后再加待测样品 10 μ l （样品最终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁， 轻轻 晃动 混匀 。

3.温育：用封板膜封板后置 37 ℃温育3 0 分钟 。

4.配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体， 甩干 ，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂 50 μ l ，空白孔除外 。

7.温育：操作同 3 。

8.洗涤：操作同 5 。

9.显色：每孔先加入显色剂 A50 μ l ，再加入显色剂 B50 μ l ，轻轻震荡混匀， 37 ℃避光显色10分钟.

10.终止：每孔加终止 液50μl，终止反应 （此时蓝色立转黄色） 。

11.测定：以空白孔调零， 4 50 nm波长依序测量各孔的 吸光 度（OD值） 。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

注意事项

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2 ． 浓洗涤液 可能 会有 结晶 析出，稀释时可在水浴中加温助溶 ，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值大于标准品孔第一孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（ n 倍）后再测定，计算时请最后 乘以 总稀释倍数（×n×5）。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1． 试剂盒保存： ；2-8 ℃ 。

2．有效期：6个月