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小鼠肝炎病毒抗体（MHV-Ab） 试剂盒使用方法
阅读：995 发布时间：2022-9-2小鼠肝炎病毒抗体实验原理：
本试剂盒应用双 抗原 夹心法测定 标本 中 小鼠 肝炎病毒抗体（ MHV-Ab ） 水平。用纯化的 抗原 包被微孔板，制成固相 抗原 ，往包被的微孔中依次加入 肝炎病毒抗体（ MHV-Ab ）， 再与 HRP 标记的 抗原 结合，形成抗原 - 抗体 - 酶标抗原复合物 ，经过*洗涤后 加 底物TMB显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 肝炎病毒抗体（ MHV-Ab ） 呈正相关。用酶标仪在 450 nm波长下测定吸光度（ OD 值）， 通过标准曲线 计算样品 中 小鼠 肝炎病毒抗体（ MHV-Ab ） 浓度。
小鼠肝炎病毒抗体试剂盒组成:
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1 |
30 倍浓缩洗涤液 |
20ml × 1 瓶 |
7 |
终止液 |
6ml × 1 瓶 |
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2 |
酶标试剂 |
6ml × 1 瓶 |
8 |
标准 品（ 20 0 ng/L ） |
0.5ml × 1 瓶 |
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3 |
酶 标包被 板 |
12 孔× 8 条 |
9 |
标准品 稀释液 |
1.5ml × 1 瓶 |
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4 |
样品 稀释液 |
6ml × 1 瓶 |
10 |
说明书 |
1 份 |
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5 |
显色剂 A 液 |
6ml × 1 瓶 |
11 |
封板膜 |
2 张 |
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6 |
显色剂 B 液 |
6ml × 1/ 瓶 |
12 |
密封袋 |
1 个 |
小鼠肝炎病毒抗体标本要求 :
1 ．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可 将标本放于 -20 ℃保存，但 应 避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品 ，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（ HRP ）活性。
小鼠肝炎病毒抗体操作步骤:
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
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100ng/L |
5 号标准品 |
150 μ l 的原倍标准品加入 150 μ l 标准品稀释液 |
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50ng/L |
4 号标准品 |
150 μ l 的 5 号标准品加入 150 μ l 标准品稀释液 |
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25ng/L |
3 号标准品 |
150 μ l 的 4 号标准品加入 150 μ l 标准品稀释液 |
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12.5ng/L |
2 号标准品 |
150 μ l 的 3 号标准品加入 150 μ l 标准品稀释液 |
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6.25ng/L |
1 号标准品 |
150 μ l 的 2 号标准品加入 150 μ l 标准品稀释液 |
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、 待测样品孔 。在酶标包被板上标准品准确加样50 μ l， 待测样品孔中先加样品稀释液40 μ l，然后再加待测样品10 μ l（样品最终稀释度为5倍）。 加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁， 轻轻 晃动 混匀 。
3. 温育：用封板膜封板后置 37 ℃温育3 0 分钟 。
4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体， 甩干 ，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50 μ l ，空白孔除外 。
7. 温育：操作同 3 。
8. 洗涤：操作同 5 。
9. 显色：每孔先加入显色剂 A50 μ l ，再加入显色剂 B50 μ l ，轻轻震荡混匀， 37 ℃避光显色10分钟.
10. 终止：每孔加终止 液50μl，终止反应 （此时蓝色立转黄色） 。
11. 测定：以空白孔调零， 4 50 nm波长依序测量各孔的 吸光 度（OD值） 。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。
小鼠肝炎病毒抗体计算:
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以 稀释倍数 ；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以 稀释倍数 ，即为样品的实际浓度。