本试剂盒仅供研究使用。

使用目的：

本试剂盒用于定性测定 羊 血清，血浆及相关液体样本中 口蹄疫抗体 (FMDV Ab) 。

实验原理

本试剂盒 采 用 间接 法测定 标本 中 羊口蹄疫抗体 (FMDV Ab) 。用纯化的 抗原 包被微孔板，制成固相 抗原 ， 与样品中 口蹄疫抗体 (FMDV Ab) 温育后，加入生物素标记的抗 IgG 抗体， 再与链霉亲和素 -HRP 结合，形成免疫复合物 ，经过*洗涤后 加 底物TMB显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在 450 nm波长下测定吸光度（ OD 值） ，与 CUTOFF 值相比较，从而判定标本中 羊口蹄疫抗体 (FMDV Ab) 的存在与否。

试剂盒组成

标本要求

1 ． 不能检测含 NaN3的样品 ，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（ HRP ）活性。

2． 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可 将标本放于 -20 ℃保存，但 应避免反复冻融

操作步骤

1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、 阳性对照 2 孔、空白对照 1 孔

2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50 μl 。然后在 待测样品孔 先加样品稀释液 40 μl ，然后再加待测样品 10 μl 。 加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁， 轻轻 晃动 混匀 ， 37 ℃温育 45 分钟。

3. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

4. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体， 甩干 ，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 4 次，拍干。

5. 加生物素标记的抗 -IgG 抗体：每孔加入生物素标记的抗 -IgG 抗体 50 μ l 。 37 ℃温育 30 分钟

6. 洗涤：操作同 4 。

7. 加链霉亲和素 -HRP ：每孔加入 50 μ l 的链酶亲和素 -HRP ，轻轻振荡混匀， 37 ℃温育 30 分钟。

8. 洗涤：操作同 4 。

9. 显色：每孔先加入显色剂 A 50 μ l ，再加入显色剂 B 50 μ l ，轻轻震荡混匀， 37 ℃避光显色15分钟.

10. 终止：每孔加终止 液50μl，终止反应 （此时蓝色立转黄色） 。

11. 测定：以空白孔调零， 4 50 nm波长依序测量各孔的 吸光 度（OD值） 。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

结果判定：

试验有效性：阳性对照孔平均值 ≥ 1.00; 阴性对照平均值 ≤ 0.20

临界值（ CUT OFF ）计算：临界值 = 阴性对照孔平均值 +0.15

阴性判定：样品 OD 值 < 临界值（ CUT OFF ）者为 口蹄疫抗体 (FMDV Ab) 阴性

阳性判定：样品 OD 值 ≥ 临界值（ CUT OFF ）者为 口蹄疫抗体 (FMDV Ab) 阳性

注意事项

1 ．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。

2 ．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

3 ． 浓洗涤液 可能 会有 结晶 析出，稀释时可在水浴中加温助溶 ，洗涤时不影响结果。

4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5 ．底物请避光保存。

6 ．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为 630nm

7 ．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的硫酸，使用时必须注意安全。

规格：

96 人份 / 盒

保存条件及有效期

1． 试剂盒保存： ；2-8 ℃ 。

2 ．有效期： 6 个月