核酸蛋白 全能检测
如果你还不知道荧光定量PCR仪可以用来做蛋白检测和分析,
那你就是“奥特曼”啦!
如果你正好在开展蛋白尤其是膜蛋白相关的科研工作,
那么恭喜你,
你又可以多一个好使的研究工具啦!
它就是新一代全光谱荧光定量PCR仪
qTOWERiris系列
全光谱检测,拓展蛋白应用
qTOWERiris突破性地将检测光谱范围拓宽到了波长更短的紫外光区域,覆盖从近紫外UVA到近红外NIR的全光谱范围,波长从360nm到730nm。这一革新性的变化,大大扩展了荧光定量PCR仪的应用场景。
1、 近紫外光区域的核酸检测应用,为做核酸多重检测的用户提供了更多的选择,比如可以检测ATTO390、ATTO425核酸标记荧光染料的信号;
2、 蛋白检测方面的应用,比如说可以利用蛋白熔解曲线分析功能,开展CPM、ANS等荧光染料标记的蛋白热稳定性检测、蛋白与配体互作研究、蛋白结晶和储存体系优化等;
在蛋白相关研究中,膜蛋白以其强大的功能性和生物学活性,成为非常重要的研究靶点,如细胞的增殖和分化、能量转换、信号转导、物质运输等,都与膜蛋白息息相关,而且估计有60%左右的药物作用都与膜蛋白有关。
由于在膜蛋白样品制备过程中,需要用到一定浓度的表面活性剂,来使脂膜解体释放膜蛋白并维持去膜状态下膜蛋白结构和功能的稳定性,因此膜蛋白样品溶液中往往含有较多的表面活性剂。如果用普通的荧光染料如SYPRO Orange去标记膜蛋白,因其溶解性不好、背景噪音高而达不到好的检测效果,此时如果换成CPM荧光染料(C24H22N2O4)就能很好地实现膜蛋白熔解曲线检测和分析。
CPM的激发光Ex为384nm,检测光Em为470nm,在近紫外区域,那么问题来了,普通的荧光定量PCR仪,激发光谱往往从450nm左右的蓝光区域开始,没有办法实现CPM的检测。而耶拿公司的qTOWERiris的紫外通道,检测光谱正好匹配CPM染料,很好地满足了CPM标记的膜蛋白的高灵敏度检测。
除了CPM荧光染料,ANS(8-苯胺基-1-萘磺酸)也是一种常用的蛋白标记荧光染料,和蛋白的结合性好,本底低。ANS的激发光Ex为380nm,检测光Em为470nm,也正是位于qTOWERiris紫外通道的检测范围。因此,qTOWERiris能为开展蛋白研究的用户提供非常方便的熔解曲线分析,进而快速获得蛋白热稳定性、蛋白和小分子互作、蛋白结晶条件优化等方面的信息。
典型的蛋白熔解曲线结果:
图1. 蛋白熔解曲线原始信号图
图2. 蛋白熔解曲线峰值图
qTOWERiris还能为您带来可靠的检测结果和人性化的使用体验。
温控精准,重复性好
延续了耶拿PCR仪经典的镀金纯银样品槽和快准稳的高速PCR技术,最大升温速率可达8℃/s,温度准确性±0.1℃,精准的温控是实现准确熔解曲线分析的重要前提,再结合先进的光学检测系统,不存在样品间的边缘效应,提供更好的检测重复性。
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