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是谁的PCR实验又失败了?

阅读:294      发布时间:2023-10-13
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时间:周五下午
坐标:实验室
认真点完96孔板的你,贴上封板膜,放入PCR仪,跑完4小时的程序后准备美美下班。看了一眼数据,再看一眼PCR板——
你(瞳孔地震):“师兄!跑完PCR,边缘孔的液体体积怎么看起来少了?”

你师兄(仔细观察):“把‘看起来’去掉。”


原来是因为

实验室前辈们总结出了影响PCR的n大要素,反应步骤、引物设计……PCR板的选择往往是最容易被忽视的,但同样至关重要。


 

划重点:PCR板的选择,你避坑了吗?


 

1. 污染源
从核酸提取开始到后续目的片段定向扩增,都要在无DNase与RNase、无PCR抑制剂的环境中进行,否则这些污染物会大大降低扩增效率。这是PCR耗材的基本要求,质量的关键取决于生产环境的洁净度和工艺质控。

 

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2. 硬度
硬质框架PCR板比普通PCR板有更高的硬度,不会出现“翘边”的现象,在贴膜的时候方便对每个孔“雨露均沾”,达到良好的密封性。

 

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3. 蒸发率
PCR实验在小体系(微升级别)中反应,且程序包含温度的循环升降,这些都容易造成体系蒸发的边缘效应,影响产物浓度。因此PCR板需搭配高质量的封板膜,降低体系蒸发率,确保最终数据的可靠性。

 

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4小时PCR后的剩余体积 (初始体积-20ul)

 

4. 荧光转化率
PCR孔壁经特殊设计的二氧化钛着色工艺,能优化荧光定量PCR (qRCR) 反应的荧光信号反射效率,减少孔间信号交叉污染。相较于透明的PCR耗材,白色PCR板和PCR管的孔壁能更灵敏地反射荧光信号,优化实验结果。

 

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特殊着色工艺的白色PCR耗材优化荧光信号结果

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  • 机械强度好,不翘边,易贴膜。

  • 搭配封板膜使用,减少蒸发边缘效应。

  • 白色PCR产品优化荧光反射,减少孔间信号交叉污染。

 

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