WB实验注意细节

1. 细胞样本，收细胞时， PBS预冷。

2. 组织样本在取材时离体组织应尽快冻存，可以置于液氮中迅速冷冻，使用组织匀浆机进行匀浆时， 一次研磨时间不宜过长， 40s左右即可，如研磨不充分，可再次研磨。

3. PMSF应注意摇匀至无结晶时方可使用。

4. 冰上裂解时，可以晃动以使裂解充分。

5. 裂解后的样本尽量分装保存，避免反复冻融，尽快变性使用。

6. BCA定量时尽量不使用96孔板最边缘一圈（由于有些仪器边缘效应）。

7. 样本可以根据具体情况稀释合适的倍数再进行定量，以免超出标曲范围。

8. BCA定量时，可以使用仪器中速轻微震荡3-10秒，混匀96孔板内液体，再进行测量。

9. 变性时，注意加热后小心管盖爆开。

10. 配胶时，板子一定彻底清洗干净。

11. 配胶的各组分注意充分混匀。

12. 点样时，多余的孔可以用loading buffer补齐。

13. 转膜时， 一定带手套才可以触碰滤纸和膜，以防污染。

14. 转膜不可放反，牢记黑胶白膜，注意电极正负极。

15. 封闭时， BSA或牛奶一定充分溶解。

16. 抗体种属要注意区分。

17. 洗膜要充分。

18. 显影液应滴加均匀。

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