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WB实验注意细节

时间:2025-5-30阅读:49
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WB实验注意细节

1. 细胞样本,收细胞时, PBS预冷。

2. 组织样本在取材时离体组织应尽快冻存,可以置于液氮中迅速冷冻,使用组织匀浆机进行匀浆时, 一次研磨时间不宜过长, 40s左右即可,如研磨不充分,可再次研磨。

3. PMSF应注意摇匀至无结晶时方可使用。

4. 冰上裂解时,可以晃动以使裂解充分。

5. 裂解后的样本尽量分装保存,避免反复冻融,尽快变性使用。

6. BCA定量时尽量不使用96孔板最边缘一圈(由于有些仪器边缘效应)。

7. 样本可以根据具体情况稀释合适的倍数再进行定量,以免超出标曲范围。

8. BCA定量时,可以使用仪器中速轻微震荡3-10秒,混匀96孔板内液体,再进行测量。

9. 变性时,注意加热后小心管盖爆开。

10. 配胶时,板子一定彻底清洗干净。

11. 配胶的各组分注意充分混匀。

12. 点样时,多余的孔可以用loading buffer补齐。

13. 转膜时, 一定带手套才可以触碰滤纸和膜,以防污染。

14. 转膜不可放反,牢记黑胶白膜,注意电极正负极。

15. 封闭时, BSA或牛奶一定充分溶解。

16. 抗体种属要注意区分。

17. 洗膜要充分。

18. 显影液应滴加均匀。

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