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影响色谱柱性能的物理参数有哪些?

阅读:1466      发布时间:2024-1-8
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HPLC(高效液相色谱)是一种常用的分析技术,被广泛应用于化学、生物、医药等领域。色谱柱是HPLC系统中的核心部件,通常由填料材料和柱壁组成。填料材料可以是各种各样的,比如疏水相和亲水相。而柱壁则是填料与流动相之间的隔离层,它能够保护填料的结构,同时也能影响分离效果。
 
影响色谱柱性能的物理参数有哪些?
 
(1) 硅胶纯度
 
硅胶纯度和残留金属离子浓度,硅胶的杂质会影响化合物的峰形,硅胶表面的金属含量高会影响碱性化合物的峰形,易发生拖尾。
 
(2) 色谱柱尺寸
 
填料床的长度和内径,增加色谱柱长度,可以在一定程度上提高柱效,但也会升高压力和导致峰展宽;宽柱径,提高载样量,但也会增加横向扩散,同样会导致峰展宽。窄柱径可以节约溶剂,可减少横向扩散,但压力较大,对系统要求较高。
 
(3) 颗粒形状及粒径
 
球形颗粒柱效高、重现性好、柱床结构均匀,不规则形柱床结构不均匀、流动相线速度不均匀,容易谱带展宽;平均颗粒直径,粒径越小,柱效越高,柱压也越高。粒径分布越广则柱效越低,压力越大。
 
(4) 颗粒表面积
 
颗粒外表面和内部孔表面的总和,以m2/g表示,相对而言高表面积对样品具有较强的保留能力,更大的柱容量和分离度。而低表面积能更快达到平衡状态,更适合梯度洗脱程序。
 
(5) 孔径
 
颗粒的孔或腔的平均尺寸,范围是80~300Å,大孔径的填料颗粒可以延长大分子溶质在填料表面的滞留时间,改善分离,所以大孔径填料适合分离大分子化合物或者水动力体积较大的分子。

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