48T/96T 小鼠N-乙酰对位苯醌亚胺(NAPQI)elisa试剂盒 操作

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小鼠N-乙酰对位苯醌亚胺(NAPQI)elisa试剂盒 操作

一、试剂盒组成

通常包括：

1. 预包被微孔板：特异性结合NAPQI的捕获抗体。
2. 标准品：已知浓度的NAPQI溶液。
3. 检测抗体：标记酶（如辣根过氧化物酶HRP）的NAPQI抗体。
4. 底物A/B：显色反应试剂（如TMB）。
5. 终止液：终止显色反应。
6. 洗涤缓冲液：用于清洗孔内非特异性结合物质。
7. 封板膜：防止反应过程中蒸发。
8. 说明书：操作指南及注意事项。

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二、检测原理

基于竞争抑制法或夹心法（具体取决于试剂盒设计）：

1. 夹心法：样本中的NAPQI与固相抗体结合，再与酶标二抗结合，通过底物显色定量。
2. 竞争法：NAPQI与酶标抗体竞争结合固相抗体，显色强度与样本中NAPQI浓度成反比。

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三、应用领域

1. 第三方研究所。
2. 医院研究。
3. 高校研究。

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四、实验步骤（简略）

1. 样本处理：离心血清/血浆，匀浆组织并提取蛋白。
2. 加样：向孔板加入标准品、样本及空白对照。
3. 孵育：加入酶标抗体，室温孵育（如1-2小时）。
4. 洗涤：去除未结合物质。
5. 显色：加入底物，避光孵育至显色。
6. 终止：加入终止液，用酶标仪读取450 nm吸光度。
7. 计算：通过标准曲线计算样本浓度。

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五、注意事项

1. 样本要求：
   • 避免反复冻融，建议分装保存（-80℃）。
   • 血清/血浆需避免溶血（红细胞释放物质可能干扰检测）。
2. 交叉反应：确保试剂盒特异性（如不与其他吲哚类代谢物交叉反应）。
3. 标准曲线：需覆盖预期样本浓度范围，R²值应＞0.99。
4. 仪器校准：使用酶标仪预热并校准波长（通常450 nm±10 nm）。
5. 实验重复：建议每样本至少3次重复以提高准确性。

小鼠N-乙酰对位苯醌亚胺(NAPQI)elisa试剂盒 操作



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