P70664 pCMV-mCherry-DDX6(human)-Neo

注意事项：转化前请准确查找该质粒相应的抗生素名称、抗生素使用浓度、感受态名称和培养温度。

1 、收到质粒干粉后请先 5000rpm 离心 1min ，再加入 20μl~50μl 无菌水或  pH8.0 的  1*TE 缓冲液来溶解质粒，室温放置 1min ；

2 、从 -80 ℃ 冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；

3 、取 2μl 质粒加至 100μl 感受态中，冰浴 30min ；

4 、 42 ℃ 热激 90s ，再冰浴 2min ；

5 、加入 900μl 无抗的 LB 液体培养基， 180rpm 震荡培养 45min ；

6 、 6000rpm 离心 5min ，仅留 100ul 上清混匀菌体沉淀；

7 、混匀后的菌液加至对应抗性的 LB 平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；

8 、将平板正向培养 1h ，再倒置培养 12h~16h ；

9 、挑取单克隆菌落至对应抗性的 LB 液体培养基中，震荡培养 12h~16h ，根据实验需要提取质粒