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简述实时荧光定量pcr仪的系统组成
2020年06月08日 15:21:10
来源：化工仪器网 点击量：7427
近期，随着疫情的发展，人们对医疗相关的科学仪器也认识不少。其中，实时荧光定量PCR仪这个名字经常出现在人们的眼前。那么，这个仪器究竟是什么呢？用来干嘛的呢？今天，小编就为大家简单介绍一下这个设备。
【化工仪器网 技术指导】近期，随着疫情的发展，人们对医疗相关的科学仪器也认识不少。其中，实时荧光定量PCR仪这个名字经常出现在人们的眼前。那么，这个仪器究竟是什么呢？用来干嘛的呢？今天，小编就为大家简单介绍一下这个设备。
实时荧光定量pcr仪，由荧光定量系统和计算机组成，用来监测循环过程的荧光。与实时设备相连的计算机收集荧光数据。数据通过开发的实时分析软件以图表的形式显示。原始数据被绘制成荧光强度相对于循环数的图表。原始数据收集后可以开始分析。实时设备的软件能使收集到的数据进行正常化处理来弥补背景荧光的差异。正常化后可以设定域值水平，这就是分析荧光数据的水平。
优势
样品到达域值水平所经历的循环数称为Ct值(限制点的循环数)。域值应设定在使指数期的扩增效率为大，这样可以获得准确，可重复性的数据。如果同时扩增的还有标有相应浓度的标准品，线性回归分析将产生一条标准曲线，可以用来计算未知样品的浓度。
系统组成
实时荧光定量PCR仪主要由两部分组成，一个是PCR系统，一个是荧光检测系统。由于定量PCR必需借助样本和标准品之间的对比来实现定量的，对于定量PCR系统来说，重要的参数除了传统PCR的温控精确性、升降温速度等等，更重要的还在于样品孔之间的均一性，以避免微小的差别被指数级放大。
至于荧光检测系统，多色多通道检测是当今的主流趋势，仪器的激发通道越多，仪器适用的荧光素种类越多，仪器适用范围就越宽；多通道指可同时检测一个样品中的多种荧光，仪器就可以同时检测单管内多模版或者内标+样品，通道越多，仪器适用范围越宽、性能就更强大。
荧光检测系统主要包括激发光源和检测器。激发光源有卤钨灯光源、氩离子激光器、发光二极管LED光源，前者可配多色滤光镜实现不同激发波长，而单色发光二极管LED价格低、能耗少、寿命长，不过因为是单色，需要不同的LED才能更好地实现不同激发波长。监测系统有超低温CCD成像系统和PMT光电倍增管，前者可以一次对多点成像，后者灵敏度高但一次只能扫描一个样品，需要通过逐个扫描实现多样品检测，对于大量样品来说需要较长的时间。定量PCR仪需要考虑的另外一个因素是软件设计，这一点目前较新型号的仪器都有不错的配套软件可以满足常规使用。
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